材料:
6孔板
marker筆
直尺
20微升槍頭(滅菌)
無(wú)血清培養(yǎng)基
PBS
準(zhǔn)備:
所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺(tái)內(nèi))
流程:
1、先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻地劃?rùn)M線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過(guò)孔。每孔至少穿過(guò)5條線。
2、在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞,具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同,掌握為過(guò)夜能鋪滿。
3、第二天用槍頭比著直尺,盡量垂直于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不要傾斜。
4、用PBS洗細(xì)胞3次,去除劃下的細(xì)胞,加入無(wú)血清培養(yǎng)基。
5、放入37℃5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按0、6、12、24小時(shí)取樣,拍照。
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