詳細介紹
2.將細胞懸液作梯度倍數稀釋,每組細胞每皿分別接種100個細胞于含10ml 37℃預溫培養(yǎng)液的皿中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。
3.置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2~3周。
4.當培養(yǎng)皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養(yǎng)。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。
5.加純甲醇或1:3醋酸/甲醇5ml,固定15分鐘。
6.去固定液,加適量Giemsa應用染色液染10~30分鐘
7.用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。
8.將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片,用肉眼直接計數克隆,或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。后計算克隆形成率。
克隆形成率=(克隆數/接種細胞數)×100%
9.平板克隆形成試驗方法簡單,適用于貼壁生長的細胞。適宜底物為玻璃的、塑料瓶皿。試驗成功的關鍵是細胞懸液的制備和接種密度。細胞一定要分散得好,不能有細胞團,接種密度不能過大。
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