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簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞劃痕檢測(cè)(wound healing)法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法,類似體外傷口愈合模型。
詳細(xì)介紹
一、實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)胞劃痕(wound healing)法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法,類似體外傷口愈合模型,在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上,用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線,去除中央部分的細(xì)胞,然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間,取出細(xì)胞培養(yǎng)板,觀察周邊細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力,實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別,通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同,可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1、 所有要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min. .
2、先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,大約每隔0.5-1cm一道,橫穿過孔,每孔至少穿過5 條線。
3、在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞(具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿),37C培養(yǎng)箱培 養(yǎng)。
4、第二天用10μ1槍頭比著直尺,與標(biāo)記線垂直的方向劃兩條平行線,槍頭要垂直,不能傾斜。
5、用PBS洗細(xì)胞3次,去除劃下的細(xì)胞,加入無(wú)血清培養(yǎng)基。
6、放入37°C 5% CO2培養(yǎng)箱,按0、6、12、24h倒置顯微鏡觀察,拍照。
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