簡要描述:細胞侵襲/遷移實驗將Transwell小室放入培養(yǎng)板中,小室內稱上室,培養(yǎng)板內稱下室,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔,將研究的細胞種在上室內,由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內的細胞,應用不同孔徑和經過不同處理的聚碳酸酯膜,就可以進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。
詳細介紹
操作步驟
(1)所有細胞培養(yǎng)試劑和Transwell chamber 放在37°C溫育;
(2)待測細胞培養(yǎng)至對數生長期,消化細胞,用PBS和無血清培養(yǎng)基先后洗滌一次,用無血清培養(yǎng)基懸浮細胞,計數,調整濃度為2X10* /ml;
(3)在下室(即24孔板底部)加入600-800μ 1含10%血清的培養(yǎng)基,上室加入100- 150μ 1細胞懸液,繼續(xù)在孵箱培養(yǎng)24小時;
(4)用鑷子小心取出chamber,吸干上室液體,移到預先加入約800μ 1甲醇的孔中,室溫固定30分鐘;
(5)取出chamber, 吸千上室固定液,移到預先加入約800μ 1 Giemsa 染液的.孔中,室溫染色15-30分鐘;
(6)輕輕用清水沖洗浸泡數次,取出chamber, 吸去上室液體,用濕棉棒小心擦去_上室底部膜表面上的細胞;
(7)用小鑷子小心揭下膜,底面朝上晾干,移至載玻片上用中性樹膠封片;
(8)顯微鏡下取9個隨機視野計數,統(tǒng)計結果。
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