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簡要描述:小鼠黑色素瘤模型是達為科生物較為成熟的動物模型之一,由動物平臺經(jīng)驗豐富的實驗員操作完成。
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裸鼠皮下成瘤實驗技巧
1、細胞狀態(tài)是成瘤實驗的關鍵,所以細胞生長狀態(tài)一定要好,取處于對數(shù)生長期的細胞,細胞達80-90%左右密度為宜;收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。
2、胰酶消化細胞后用預冷的PBS洗兩遍,目的為去除細胞中的血清。
3、用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細胞沉淀至合適的濃度,一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/支,接種體積為0.1ml,因此細胞懸液的濃度為1-5×10^7個細胞/ml。
4、細胞消化后應盡快接種到裸鼠皮下,一般盡量在半小時內(nèi)完成,途中將細胞懸液放在冰上降低細胞的代謝。
5、選擇的裸鼠一般在5-8周齡,體重18-20g左右,種植部位選擇血供豐富區(qū)域,如腋窩中后部、腹股溝中上部。
6、接種前用槍將細胞懸液充分的吹散,防止細胞成團而降低細胞成活率。
7、接種時,針頭在皮下進針深一點,約1cm深,減少注射后細胞懸液從針眼溢出。
8、如何抓牢裸鼠?左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚,小拇指夾住裸鼠尾巴。
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