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熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)是以熒光素(luciferin)為底物來(lái)檢測(cè)熒光素酶活性的一種報(bào)告系統(tǒng)。熒光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過(guò)程中，會(huì)發(fā)出生物熒光(bioluminescence)。然后可以通過(guò)熒光測(cè)定儀（化學(xué)發(fā)光儀）測(cè)定luciferin氧化過(guò)程中釋放的生物熒光。熒光素和熒光素酶這一生物發(fā)光體系，可以極其靈敏、高效地檢測(cè)基因的表達(dá)。雙熒光素酶體系，即有兩種熒光素酶，比較常見(jiàn)的組合是螢火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素酶，螢火...

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】（1）細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)：HeLa細(xì)胞常規(guī)傳代培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(見(jiàn)細(xì)胞傳代培養(yǎng)）。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞加入順鉑溶液（生理鹽水配置）至終濃度為20μmo1/L,37℃，5%CO2條件下繼續(xù)培養(yǎng)?？瞻讓?shí)驗(yàn)對(duì)照加入等體積的生理鹽水，同樣條件繼續(xù)培養(yǎng)。24h后進(jìn)行染色及形態(tài)學(xué)觀(guān)察。（2）胰酶消化細(xì)胞，將培養(yǎng)基上清及消化下來(lái)的細(xì)胞一同轉(zhuǎn)入離心管中600~800r/min離心10min。（3）吸去上清，用1mLPBS重懸細(xì)胞沉淀，并轉(zhuǎn)入1.5mL微量離心管中，600~800r/min...

微孔濾膜培養(yǎng)小室及雙室聯(lián)合培養(yǎng)系統(tǒng)（Transwell實(shí)驗(yàn)）：應(yīng)用微孔濾膜培養(yǎng)小室，進(jìn)行膠質(zhì)瘤細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的聯(lián)合培養(yǎng)，可以更接近體內(nèi)環(huán)境，模擬瘤細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用，濾膜上8μm的微孔可允許內(nèi)皮細(xì)胞穿過(guò)到達(dá)膜的下面，這些穿越遷移的內(nèi)皮細(xì)胞可粘附于膜的下面，通過(guò)計(jì)數(shù)濾膜下面的細(xì)胞可基本反映細(xì)胞的遷移情況。Transwell的基本原理是將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱(chēng)為上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱(chēng)為下室，上室內(nèi)添加上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)添加下層培養(yǎng)液，上下層培養(yǎng)液以膜相隔。將...

一、實(shí)驗(yàn)原理各種細(xì)胞操作，包括傳代、凍存和原代組織的分離，均能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。為了確定群體細(xì)胞中的存活細(xì)胞數(shù)，可采用臺(tái)盼藍(lán)染料排斥實(shí)驗(yàn)（Phillips1973)。正常的健康細(xì)胞能排斥染料，但細(xì)胞膜完整性喪失后臺(tái)盼藍(lán)可彌散入細(xì)胞內(nèi)。染料排斥實(shí)驗(yàn)是一種粗糙的估計(jì)細(xì)胞活力的方法，無(wú)法區(qū)別10%~20%的活力差異。除此之外，排斥染料的細(xì)胞有可能不貼壁或不能較長(zhǎng)時(shí)問(wèn)生存或繁殖。二、實(shí)驗(yàn)方法1)胰蛋白酶處理細(xì)胞，無(wú)菌狀態(tài)下取0.5ml細(xì)胞用PBS稀釋至每毫升2X105~4X105。2)向...

一、細(xì)胞轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩大類(lèi)。本實(shí)驗(yàn)室主要是質(zhì)粒轉(zhuǎn)染、miRcroRNA轉(zhuǎn)染、慢病毒轉(zhuǎn)染、藥物轉(zhuǎn)染、多肽轉(zhuǎn)染等。二、miRcroRNA轉(zhuǎn)染（一）實(shí)驗(yàn)材料及試劑六孔板、CO2培養(yǎng)箱、EP管、酒精燈等；無(wú)血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM、RNA、lipofectamine2000、MSC細(xì)胞等。（二）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1當(dāng)六孔板中MSC細(xì)胞密度達(dá)90％時(shí)，準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染，將無(wú)血清培養(yǎng)基、MEM-α或DMEM取出...

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期1。實(shí)驗(yàn)原理用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期，通常用碘化丙啶（propidiumiodide，PI）染細(xì)胞核。PI在一定波長(zhǎng)的光下發(fā)出熒光，其強(qiáng)度與DNA含量成正比。通過(guò)流式細(xì)胞儀分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，可檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡。2。流式細(xì)胞儀檢測(cè)A549細(xì)胞周期步驟收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，計(jì)數(shù)，以(1~5)×105/孔接種于6孔板，置37℃，5％CO2條件下培養(yǎng)過(guò)夜，使細(xì)胞貼壁。次日更換培養(yǎng)液，各孔分別加入含有0、80、400、2000、10000mg/L不同濃度茶...

1、炎癥灶內(nèi)主要是巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)。單核吞噬細(xì)胞的浸潤(rùn)對(duì)慢性炎癥十分重要。單核細(xì)胞從血管游出后轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞還可被激活。在炎癥灶局部巨噬細(xì)胞的積聚有三方面的原因：①由于從炎癥灶不斷產(chǎn)生吸引單核細(xì)胞的趨化因子，如C5a、纖維蛋白多肽、陽(yáng)離子蛋白質(zhì)及膠原和纖維粘連蛋白的分解產(chǎn)物等。因此，從血液循環(huán)中滲出的單核細(xì)胞源源不斷來(lái)到局部，這是局部巨噬細(xì)胞的主要來(lái)源。②游出的巨噬細(xì)胞在局部通過(guò)有絲分裂而增殖，但巨噬細(xì)胞局部增殖的起始動(dòng)因還不清楚。③炎癥灶內(nèi)的巨噬細(xì)胞...