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4-23
ELISA實(shí)驗(yàn)因靈敏度高,特異性強(qiáng)在生物科研上得到了廣泛的認(rèn)可,但對(duì)初學(xué)者而言,如不注意實(shí)驗(yàn)操作過程中的各個(gè)環(huán)節(jié),可能會(huì)對(duì)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生比較大的影響,比如實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)白板,顯色弱靈敏度低,花板無梯度背景高等現(xiàn)象。下面對(duì)以上實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象進(jìn)行一一解析。1.白板現(xiàn)象在完成所有實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行底物TMB溶液顯色后,酶標(biāo)板中所有孔的顏色均為無色,即無信號(hào)呈現(xiàn)。出現(xiàn)該現(xiàn)象的可能原因:試劑已過保質(zhì)期,不同批次稀釋液交叉使用。錯(cuò)加漏加檢測(cè)A,檢測(cè)B或者底物溶液TMB。洗板或者加樣過程中,酶標(biāo)記物被污...
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吉姆薩染液由天青,伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對(duì)細(xì)胞核和寄生蟲著色較好,結(jié)構(gòu)顯示更清晰,而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差?;痉桨笇?shí)驗(yàn)材料原位雜交玻片試劑、試劑盒吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯儀器、耗材染色盤培養(yǎng)箱濾紙實(shí)驗(yàn)步驟1.將顯影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盤中。(1)1個(gè)盤:pH6.810mmol/l磷酸鈉緩沖液,所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。(2)3個(gè)盤:水。(3)脫水系列溶液:①3個(gè)盤:分別盛50%、70%和95%乙醇。②2個(gè)盤:盛有...
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蛋白提取組織樣本總蛋白提取(小鼠肝組織)1、頸椎脫臼處死小鼠,75%乙醇擦拭皮膚,剪開腹腔,剪切肝臟組織。2、平皿中放入6ml預(yù)冷0.9%NaCL。3、稱取0.6g左右肝組織,在平皿中剪碎組織,并轉(zhuǎn)移到勻漿器。4、預(yù)冷裂解液中添加PMSF(20ug/2ml)。5、取2ml預(yù)冷裂解緩沖液,迅速加入勻漿器,冰浴條件下充分研磨。6、組織研磨液轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管。7、4℃,15000rpm,離心10min。8、取上清組織蛋白粗提取液至新的1.5ml離心管。9、進(jìn)行蛋白定量,-80...
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1.對(duì)于貼壁細(xì)胞或細(xì)胞涂片PBS洗滌一次。2.如果細(xì)胞貼得不牢,可以干燥樣品使細(xì)胞貼得更牢。3.用4%多聚甲醛固定細(xì)胞15分鐘,用PBS洗滌一次。4.將切片移入濕盒中加入新鮮配制的3%雙氧水,以去除內(nèi)源性過氧化物酶封閉液,室溫孵育10分鐘,PBS充分淋洗;5.滴加正常山羊血清封閉液,室溫30分鐘,甩去多余液體;6.滴加一抗工作液,37℃孵育2h(或4℃過夜),然后PBS充分淋洗;7.滴加兔/鼠二抗工作液,室溫孵育1h,PBS充分淋洗;8.DAB顯色5-10分鐘,在顯微鏡下掌握...
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一般使用辣根過氧化物酶HRP-ECL發(fā)光法或堿性磷酸酶AP-NBT/BICP顯色法。1.HRP-ECL發(fā)光法:將A、B發(fā)光液按比例稀釋混合。膜用去離子水稍加漂洗,濾紙貼角吸干,反貼法覆于A、B混合液滴上,熄燈至可見淡綠色熒光條帶(5min左右)后濾紙貼角吸干,置于保鮮膜內(nèi)固定于片盒中,迅速蓋上膠片,關(guān)閉膠盒,根據(jù)所見熒光強(qiáng)度曝光。取出膠片立即*浸入顯影液中1~2min,清水漂洗一下后放在定影液中至底片*定影,清水沖凈晾干,標(biāo)定Marker,進(jìn)行分析與掃描。2.AP-NBT/B...
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目的:研究楊梅苷對(duì)大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法:60只SD大鼠隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組、模型組、陽性給藥組(維拉帕米100μg/L)和楊梅苷低中高劑量組(2.5,5,10mg/L),每組10只。釆用Langendorff離體心臟灌流技術(shù),停灌30min,再灌45min,造成心肌缺血再灌注損傷模型。記錄楊梅苷對(duì)心臟血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的影響,測(cè)定冠脈流出液中心肌三酶LDH、CK、AST的水平,心肌組織中抗氧化酶SOD、CAT的活性及脂質(zhì)過氧化物MDA的含量。HE...
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目的:探討和比較不同干預(yù)方案下辛伐他汀對(duì)去卵巢大鼠骨丟失和骨質(zhì)量下降的干預(yù)效果。方法:3月齡雌性SD大鼠32只,隨機(jī)分為4組,每組8只:假手術(shù)(A)組、卵巢切除(B)組、卵巢切除加辛伐他汀前半程干預(yù)組(C)和后半程干預(yù)組(D)。除A組接受假手術(shù)外,其余各組大鼠行雙側(cè)卵巢切除術(shù),C組于術(shù)后給予辛伐他汀(5mg/kg/d)干預(yù)10周后停藥,D組于術(shù)后10周開始接受辛伐他汀干預(yù)。術(shù)后20周處死所有大鼠,采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)血清I型前膠原氨基端前肽(PINP)、I...
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