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動物雄性成年C57BL/6小鼠(8-16周齡;體重約20g);造模在50ml塑料管上開幾個孔以保持氣流,將動物置于這樣的塑料管中,從而使動物暴露于慢性束縛應激中。實驗從上午11:00開始,每天4-8小時,整個過程持續(xù)14天,而對照組則在同一時間無束縛地剝奪食物和水。在慢性束縛的最后一天測量每只小鼠的體重。模型評估1.蔗糖偏好試驗小鼠單獨飼養(yǎng),無任何應激條件下,給予1%蔗糖溶液和水2天;1%蔗糖溶液和水的瓶子位置在24小時切換。之后,小鼠被剝奪食物和水12小時;在黑暗環(huán)境下,同...
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戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)是一種高度敏感的化合物,有毒物質;小心處理。1.將2mg/mLPTZ溶解在無菌0.9%(w/v)NaCl中。在使用當天準備PTZ。2.對于野生型C57BL/6小鼠,試驗建議劑量為30-35mg/kg。對PTZ的敏感性取決于使用的小鼠品系,注射劑量因實驗目的而異。3.服用PTZ后觀察動物行為30分鐘,并對異常行為進行分類和評分。如果可能,觀察動物24小時,或注射后至少再觀察6-10小時,特別是在癲癇發(fā)作嚴重時得分達到3分或以...
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背景:顱腦外傷(TBI)是世界范圍內威脅生命的疾病。大多數中國人由于運動受傷,辦公室或家中意外摔倒以及摩托車受傷而患有TBI。由于社會對疾病的了解不多,因此TBI被稱為“沉默流行病”。TBI后繼發(fā)性腦損傷引起病理,生理和生物學反應,導致腦功能障礙。生物和化學過程通常觸發(fā)連鎖反應,可導致炎癥細胞,能量缺乏,興奮性毒性,細胞凋亡和氧化應激。氧化應激在上述過程中起重要作用。氧化會增強炎癥和其他反應,因此促進炎癥和其他反應會加劇氧化應激并形成惡性循環(huán)。氧化應激在TBI后一小時發(fā)生,并...
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目的:理解低氧預處置對子宮內膜異位癥大鼠模型異位病灶構成的影響,藉此進一步說明EMs發(fā)作開展的分子機制,從而為其防治供新思緒。辦法:Lewis雌性大鼠隨機分為兩組,分別給予HPC(8%O2)和常壓常氧(21%O2)處置8h,隨即取其子宮組織移植至正常大鼠腹壁。術后14d記載移植灶體積,并采用ELISA、免疫組化、Westernblot、RT-PCR和Tunnel法,對血清和腹腔液以及移植前子宮組織和移植病灶停止檢測。結果:HPC可顯著上調大鼠子宮血管內皮生長因子(VEGF)m...
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一、原理培養(yǎng)的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好,所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞,總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力,由組織中分離細胞一般也要檢查活力,以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用。復蘇后的細胞也要檢查活力,了解凍存和復蘇的效果。用臺盼蘭染細胞,死細胞著色,活細胞不著色,從而可以區(qū)分死細胞與活細胞。利用細胞內某些酶與特定的試劑發(fā)生顯色反應,也可測定細胞相對數...
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材料:6孔板marker筆直尺20微升槍頭(滅菌)無血清培養(yǎng)基PBS準備:所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)流程:1、先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻地劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2、在空中加入約5X105個細胞,具體數量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。3、第二天用槍頭比著直尺,盡量垂直于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不要傾斜。4、用PBS洗細胞3次,去除劃下的細胞,加入...
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初代培養(yǎng)或原代培養(yǎng),是從供體獲取組織后的培養(yǎng)。組織和細胞剛剛離體,生物性狀尚未發(fā)生很大的變化,具有二倍體遺傳性狀,在供體來源充分、生物條件穩(wěn)定的情況下(年齡、性別),在一定程度上能反映體內狀態(tài)。實驗方法原理消化培養(yǎng)法合成培養(yǎng)基胰蛋白酶消化培養(yǎng)法,能把組織塊分散成細胞團或單個細胞,便于細胞從培養(yǎng)液中攝取營養(yǎng)和排出代謝產物,細胞能較快地長成單層。本法尤適用于培養(yǎng)大量組織,細胞產量高;但用于經常性小量培養(yǎng)工作稍顯繁瑣,無菌操作不良時且易污染。實驗材料組織試劑、試劑盒Hanks培養(yǎng)液...